ELISA - Ensüümiga Seotud Immunosorbentanalüüs: ärakiri

2023 Autor: Riley Dean | [email protected]. Viimati modifitseeritud: 2023-05-24 12:07

Diagnostiline meetod (ELISA) on informatiivne ja mitte liiga kallis, seetõttu pakuvad paljud laborid oma klientidele seda meetodit (ensüümidega seotud immunosorbentanalüüs). Uuring viiakse läbi tühja kõhuga, analüüsimiseks võetakse veri patsiendi kubitaalsest veenist. Enne ELISAt on soovitatav mitte suitsetada ega alkoholi tarvitada.

Artikli sisu:

• 1 Mis on ELISA vereanalüüs
• 2 Mis on immunoglobuliinid?
• 3 Kuidas vere ELISA-d tehakse
• 4 Immuunanalüüs parasiitide vastu ELISA abil
• 5 Kuidas ELISAt kasutatakse?
• 6 Testi immunoloogiliseks vereanalüüsiks ELISA abil
• 7 Vere immunoloogilise analüüsi ulatus ELISA abil
• 8 Näidustused ja tuvastatud haigused ELISA abil
• 9 ELISA meetodi eelised
• 10 ELISA meetodi puudused
• 11 ELISA võimalikud tulemused

Mis on ELISA vereanalüüs

Vereanalüüsi meetodite hulgas, mis võimaldavad hinnata keha võimet nakkushaigustele vastu seista ja näidata haiguse faasi, on olulisel kohal ensüümidega seotud immunosorbentanalüüs (ELISA). See uuring võimaldab põhjalikult hinnata vere kaitsefunktsiooni aktiivsust ja tuvastada immuunpuudulikkuse seisund nakkuslike patoloogiate korral, samuti verehaigused, autoimmuunprotsessid, hormonaalsed probleemid.

See on laboratoorne uuring, mis võimaldab teil tuvastada spetsiifiliste antikehade (valgu iseloomuga vere kaitsefaktorid) olemasolu teatud antigeenide (patogeensed ained) suhtes. Antikehade hulgas on ülitähtis immunoglobuliinid, mis võivad eksisteerida immunokomplekside kujul.

Immunoglobuliinid toodetakse inimese immuunsuse keerukate neurohumoraalsete reaktsioonide tagajärjel, mis tekivad vastusena võõraste antigeenide sissetoomisele. Iga patogeeni tüübi jaoks toodetakse oma spetsiifilised antikehad. Need toimivad antigeeni või patoloogilise mikroorganismi "sidudes", moodustades keeruka ühendi "antigeeni-antikeha" koos järgneva neutraliseerimise, ensümaatilise lüüsi, fagotsütoosireaktsioonide ja kehast väljaviimisega. ELISA meetod määrab teatud komplekside olemasolu abil patogeeni tüübi või patsiendil esineva kahjuliku aine.

Vere madala hinna ja biomaterjalina kasutamise tõttu kasutatakse meetodit sõelumismeetodina. Näiteks kui parasitoosi kahtlustatakse, annetavad patsiendid verd ümarusside, lamblia jne antikehade määramiseks. Kui tulemus on positiivne, ei tohiks te parasiitide ravi kohe alustama - peate võrdlema kliinilist pilti, ELISA tulemusi ja võimaluse korral ka teiste uurimismeetodite tulemusi.

Tasub meeles pidada, et pärast lõppenud ravikuuri võivad antikehad jääda meie kehasse väga pikaks ajaks, isegi pärast seda, kui nakkus on meie kehast lahkunud, s.t. jääb alles nn seroloogiline arm. Näiteks öötaevas on tuhandeid tähti. Paljud neist tähtedest on juba ammu surnud, kuid nende valgus on siiani paistnud sajandeid. Tegelikult näeme ainult täherada. Valgust on, kuid täht on juba ammu kadunud.

Kuid kui valgust pole, ei tähenda see seda, et tähte ei olnud. Sama on antikehadega. Nende olemasolu ei taga soovitud nakkusetekitaja olemasolu kehas. Antikehade puudumine ei tähenda, et nakkust pole. Kui ELISA-analüüsi tulemus on positiivne, tähendab see, et peate nakkuse otsima spetsiifilisemate ja kallimate meetodite abil - PCR, bakterioloogilised kultuurid. Valepositiivne tulemus on võimalik, kui mitmel mikroobil on sarnane antigeenne struktuur, siis toodetakse erinevatele mikroobidele “sarnaseid” antikehi.

Mis on immunoglobuliinid

Avastatud ja uuritud on 5 peamist immunoglobuliinide klassi - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. ülejäänud roll pole veel täielikult selgunud ja see on alles teadusuuringute etapis.

Immunoglobuliin A (IgA) peamine ülesanne on hingamisteede, seedetrakti ja kuseteede limaskestade kaitsefunktsioonides. Haiguse ägeda alguse korral on neid võimatu tuvastada. Need kaitsekompleksid ilmnevad alles 2 nädalat pärast haiguse algust, mõnikord hiljem. Suurem osa immunoglobuliin A kontsentreerub limaskestadesse. Ligikaudu 80%. Ülejäänud antikehad ringlevad veres.

Peamine funktsioon on mikroorganismide neutraliseerimine ja hävitamine. Pärast haiguse ägedate ilmingute taandumist hakkab nende immunoglobuliinide hulk vähenema ja kaob täielikult kuni 8 nädalat pärast haiguse algust. Kui IgA avastatakse hiljem, näitab see protsessi kroonimist.

Areneva patoloogia ägeda faasi peamised ja esimesed markerid on M-klassi immunoglobuliinid (IgM). Need leitakse halva enesetunde alguse 5. päevaks. Nende olemasolu veres saab kindlaks teha umbes 6 nädala jooksul. Siis hakkavad nad kiiresti kaduma.

Immuunvastuse jääki iseloomustab klassi G immunoglobuliinide (IgG) esinemine veres. Nende tegurite ilmnemine veres tuvastatakse umbes kuu pärast haiguse algust. Tulevikus saab neid määrata mitmeks kuuks, aastateks ja isegi kogu eluks, täites kaitsefunktsiooni haiguse taastumise (retsidiivi) vastu ja mõnel juhul muutes patoloogia sekundaarse arengu võimatuks.

Kui immunoglobuliini G hulk hakkab taas tõusma, võib kahtlustada uuesti nakatumist. Sarnase järelduse võib teha ka siis, kui tehakse kaks või kolm testi, mille intervall on 2 nädalat.

Parasitoloogia praktikas kasutatakse immunoglobuliini E (IgE). Immunoglobuliin D (IgD) paikneb B-lümfotsüütidel ja seda leidub tervetel inimestel väikestes kontsentratsioonides. Pärast 10 eluaastat saavutab see oma maksimumväärtused. Immunoglobuliini D hulk suureneb raseduse ajal, süsteemsete sidekoehaiguste, bronhiaalastma ja immuunpuudulikkuse seisundist põhjustatud haiguste korral.

Kuidas vere ELISA-d tehakse?

Ensüümi immuunanalüüsiks kasutatakse enamikul juhtudel patsientide verd, mõnikord võetakse klaaskeha keha kude, selgroo kanali vedelikku ja amnionivedelikku.

Veri tõmmatakse süstlanõela kaudu kubitaalsest veenist süstlasse. Uuring viiakse läbi tühja kõhuga. Tuleb meeles pidada, et teatud ravimite võtmine võib testi tulemust mõjutada. Enne vere annetamist peate hoiduma suitsetamisest, alkoholi tarvitamisest. Narkootiliste ainete tarbimine võib tulemusi moonutada.

Immunoglobuliinide IgM, IgG, IgA negatiivsete väärtuste korral võime rääkida haiguse puudumisest või selle algfaasist ning tulemus koos miinustega on võimalik täieliku taastumisega märkimisväärse aja möödudes.

Kui IgA ja IgM ei tuvastata ja IgG avaldub positiivselt, siis räägime tõenäoliselt moodustunud immuunsusest pärast nakkushaigust või pärast vaktsineerimist.

Kui IgA ja IgM ei tuvastata ja IgG avaldub positiivselt, siis räägime suure tõenäosusega tekkinud nakkushaiguse või vaktsineerimise järgsest immuunsusest

IgM kõrge tiitri korral, millel on IgG, IgA negatiivsed väärtused, võib järeldada, et tegemist on ägeda nakkushaigusega.

Immunoglobuliinide - IgA, IgM, IgG - tulemuste samaaegsed positiivsed väärtused on iseloomulikud olemasoleva kroonilise haiguse kordumise ägedas faasis.

Protsessi vaibumise (remissiooni) faasis esineva kroonilise infektsiooni korral näitab ELISA immunoglobuliini M (IgM) negatiivseid väärtusi, immunoglobuliinide G (IgG) ja A (IgA) tulemus aga positiivne.

Parasiitide immuunanalüüs ELISA abil

ELISA on parasiitide ensüümidega seotud immunosorbentide testi lühend. See tähendab inimese immuunsussüsteemi meditsiinilist kontrolli. Test põhineb antikehade võimel oma värvi muuta. Sellel diagnoosimismeetodil on palju positiivseid omadusi. Näiteks suudab ta tuvastada tohutul hulgal nakkuse põhjustatud haigusi. See on kõige tõhusam parasiitide põhjustatud haiguste korral.

Mida antud tehnoloogia annab: helmintide esinemise määramine veres; keha muude patogeenide otsimine; saate teada oma tervise halvenemise põhjuseid; ravi põhineb ka sel viisil saadud analüüsidel; saate jälgida oma immuunsussüsteemi tervist.

Veel üks hea omadus on võime jälgida vähimarkereid sõltumata nende päritolust, kuid muidugi sõltuvalt nende olemasolust kehas. See test sobib ka inimese reproduktiivse süsteemi seisundi kirjeldamiseks. Teatud valkude, hormoonide ja peptiidide olemasolu võimaldab hinnata partneri potentsiaali lapse eostamisel, samuti tulevase loote eeldatavat kvaliteeti.

Giardia vereanalüüs on tänapäevaste arstide seas üsna populaarne tava. Lisaks on see uurimismeetod suurepärane vahend biomeditsiini analüüsi ja kvantitatiivse statistika jaoks konkreetsete antigeenide osas.

Kuidas ELISA meetodit kasutatakse?

ELISA meetodi segamine sondeerimismeetodi ja sellele järgneva väljaheidete uurimisega oleks suur viga. Viimaseid kasutatakse mikroskoopilisel tasemel, kui võetakse patsiendi väljaheiteproov või see võetakse potentsiaalselt patsiendilt otse meditsiiniasutuses. Proovis proovivad nad tuvastada helmintiaarse sissetungi ja muid komponente, mis on ühel või teisel viisil seotud parasiitide elutähtsa tegevusega. Uuritakse mitte ainult mikroskoopilisi parasiitorganisme, vaid ka nende säilmeid, munarakke ja vastseid.

ELISA tõlgendamine ei pruugi anda teile täielikku arusaamist probleemist, seetõttu on kõige parem pöörduda arsti või laboriassistendi poole. Samuti on ekslik arvata, et see meetod on asjakohane ainult siis, kui helmintid parasiteerivad soolestikku. Samuti diagnoositakse paljusid teisi organeid - parasiidid võivad elada kaksteistsõrmiksooles, sapitees, maksas ja isegi kõhunäärmes.

Tõsi, need on keerukamad juhtumid, nii et sellise analüüsi kvaliteet sõltub suuresti katseid teostava labori töötajatest. Tehnoloogia omadused ja erinevus vanast laboriuuringust:

• nüüd kasutatakse väljaheiteproovi asemel helminti esinemise kindlakstegemiseks verd;
• proovi uuring viiakse laboris läbi väga kiiresti, järgmisel päeval saate täielikku teavet;
• laboratoorsete uuringute maksumus on odav, kuna teoloogia on väga lihtne;
• helmintide vereanalüüs annab kõrge täpsuse määra.

Testi tulemuste asjakohasus ja usaldusväärsus on otseselt võrdelised meditsiinitöötajate kvalifikatsiooni, labori tehnilise varustusega, samuti arstide hooletuse või tähelepanematuse puudumisega. Isegi kõige tähelepanelikumal ja vastutustundlikumal laboratoorsel assistendil on tohutuid raskusi, kui parasiit on kehas selle minimaalses populatsioonis või kui sidur tehti kohe katsetamise ajal.

Vere immunoloogiline analüüs ELISA abil

Vähesed inimesed teavad, millised vereanalüüsid on inimese immunoloogilise süsteemi seisukohast, kuna need testid pole nii tavalised. Reeglina annab selline vereanalüüs teavet immuunpuudulikkuse viiruse kohta inimkehas ja on anonüümne, kuna seda tehakse patsiendi soovil.

Põhimõtteliselt on ELISA analüüsi jaoks uuritavaks bioloogiliseks materjaliks veri, kuid uurida võib tserebrospinaalvedelikku, klaaskeha sisu, amnionivedelikku jne.

Proovide võtmiseks kasutatakse tühja kõhuga veenist võetud verd, millest uurimiseks tsentrifuugimise teel saadakse seerum. Lisaks võib vereseerumi uurimine paljastada mitmeid sugulisel teel levivaid haigusi (süüfilis, herpes, klamüüdia), aga ka kõiki hepatiidi, leetri, punetiste, mumpsi ja toksoplasmoosi liike.

Põhimõtteliselt on ELISA analüüsi jaoks uuritavaks bioloogiliseks materjaliks veri, kuid uurida võib tserebrospinaalvedelikku, klaaskeha sisu, amnionivedelikku jne.

Immunoglobuliinid on immuunmolekulid, mis võivad seonduda ja neutraliseerida kehas enamikke nakkusohtlikke patogeene ja toksiine. Sel juhul on immunoglobuliinide kõige olulisem omadus nende spetsiifilisus, see tähendab võime seostuda konkreetse antigeeniga. Just seda omadust kasutatakse immunoglobuliini vereanalüüsi tegemiseks.

Immunoglobuliine on viis tüüpi, kuid enim uuritud on immunoglobuliinid A, M ja G. Immunoglobuliinid M ja G on aktiivsed veres. Immunoglobuliinid A on omamoodi barjäär limaskestade pinnal, kuna neid leidub seal suures koguses.

Immunoloogiline vereanalüüs võimaldab teil määrata immunoglobuliinide tüüpi, tänu millele võimaldab ELISA mitte ainult diagnoosida haigust, vaid ka määrata selle staadium ja jälgida haiguse dünaamikat:

• haiguse esimese 2 nädala jooksul leitakse ainult immunoglobuliinid A;
• haiguse 2. kuni 3. nädalani leitakse veres immunoglobuliinid A ja M;
• CC3 4 nädala jooksul, immunoglobuliini vereanalüüs määratakse kõigi kolme tüübi järgi;
• taastumise ajal kaovad veres immunoglobuliinid M ning A ja G hulk väheneb 2–4 korda;
• kroonilise protsessi juuresolekul esinevad veres tingimata immunoglobuliinid G, immunoglobuliinid M puuduvad, immunoglobuliinid A võivad esineda või puuduvad.

ELISA abil immunoloogilise vereanalüüsi ulatus

• Viirushaiguste diagnostika: hepatiit, herpes, Epstein-Barri viirus, tsütomegaloviirus jne.
• sugulisel teel levivad nakkused: klamüüdia, gonorröa, Trichomonas, mükoplasma, ureaplasma;
• süüfilis; endokrinoloogia (hormoonide taseme määramine);
• kasvaja markerid (onkoloogiliste haiguste diagnostika); immunoloogia (immuunpuudulikkuse diagnostika);
• allergoloogia (allergiate diagnoosimine ja ravi).

Seroloogiline vereanalüüs on laboratoorsete vereanalüüside meetod, mida kasutatakse nakkushaiguste diagnoosimiseks ja nakkusliku protsessi staadiumi määramiseks. Seroloogiline vastus põhineb antikehade ja antigeenide interaktsioonil.

Mikroorganismide perekonna ja liikide määramiseks kasutatakse antigeenide määramist. Seda uurimismeetodit kasutatakse uroloogias ja venereoloogias. Veri seroloogilise vereanalüüsi jaoks võetakse hommikul veenist tühja kõhuga.

Näidustused määramiseks ja tuvastatud haigused ELISA meetodil

ELISA peamine biomaterjal on vereseerum: laboratooriumis võetakse patsiendilt veenist vereproov, millest eemaldatakse analüüsi raskendavad vormitud elemendid. Mõnel teisel juhul kasutatakse analüüsiks tserebrospinaalvedelikku, amnionivedelikku, limaskestade määrdumist jne.

Tulemuste moonutuste vältimiseks soovitatakse verd loovutada tühja kõhuga ning kaks nädalat enne uuringut (kui eesmärk on krooniliste, latentsete nakkushaiguste diagnoosimine) tuleb lõpetada antibiootikumide ja viirusevastaste ravimite võtmine. ELISA näidustatud näidustuste täielikku loetelu ei ole võimalik katta.

Analüüsi kõige tavalisemad eesmärgid on:

• ägedate ja krooniliste nakkushaiguste diagnostika: A, B, C, E viirushepatiidi IgM ja IgG, samuti hepatiit B ja C antigeenid; IgG kuni HIV; Ig M ja IgG tsütomegaloviiruse infektsioonile; Ig M ja IgG viirusele Epstein-Barr; Ig M ja IgG herpesnakkuste korral; Ig M ja IgG toksoplasmoosini;
• Ig M ja IgG leetrite, punetiste, salmonelloosi, düsenteeria, puukentsefaliidi ja muude haiguste korral; Parasiithaiguste IgG; Ig M ja IgG sugulisel teel levivatesse nakkustesse; IgG Helicobacter pylori infektsioon. Inimese immuunsuse näitajate ja mõnede autoimmuunhaiguste markerite üldhinnang. Onkoloogiliste markerite tuvastamine (tuumori nekroosifaktor, eesnäärmespetsiifiline antigeen, vähi-embrüonaalne antigeen ja teised). Hormoonide sisalduse määramine vereseerumis (progesteroon, prolaktiin, testosteroon, kilpnääret stimuleeriv hormoon ja teised).

ELISA meetodi eelised

ELISA vaieldamatud eelised on meetodi kõrge tundlikkus ja spetsiifilisus. Tundlikkus on võime märklauainet ära tunda, isegi kui selle kontsentratsioon proovis on madal. Spetsiifilisus tähendab teiselt poolt vigadeta diagnoosi: kui tulemus on positiivne, tähendab see, et leiti täpselt eeldatud antikeha või antigeen, mitte mõned teised.

ELISA on suures osas asendanud mikrobioloogia "kullastandardi" - bakterioloogilise diagnostilise meetodi, mille käigus haigusetekitaja tuvastamiseks nõuti selle eraldamist kehast ja seejärel kultuuri kasvatamist mitmekümne päeva jooksul katseklaasis toitekeskkonnas.

Kogu aeg, kuni analüüsi tehti, olid arstid sunnitud patsienti ravima "pimesi", arvates haiguse sümptomite järgi mikroorganismi päritolu. IgM määramine ELISA abil võimaldab teil täpset diagnoosi teha juba haiguse esimestel päevadel.

Ensüümi immuunanalüüsi kõrge valmistatavus minimeerib inimfaktori mõju, mis vähendab vea tõenäosust. Enamik tänapäevastes laborites kasutatavaid ELISA testikomplekte ja reaktiive on toodetud tööstuskeskkonnas, mis tagab täpse tulemuse.

ELISA meetodi puudused

Kahjuks peate ELISA läbiviimiseks teadma, mida täpselt otsida: analüüsimeetod eeldab, et arstil on haiguse olemuse kohta juba eeldus. Seetõttu pole mõtet sellist testi ette kirjutada, lootes diagnoosi juhuslikult "ära arvata".

Nakkushaiguste diagnoosimise korral ei suuda ensüümi immuunanalüüs patogeeni leida ja selle spetsiifilisi omadusi kindlaks teha: see näitab ainult antikehade olemasolu patsiendi veres, osutades kaudselt võõra mikroorganismi olemasolule inimese kehas. ELISA on äärmiselt täpne, kuid mitte odav meetod, seetõttu peate seda mõistlikult kasutama ja tulemusi peaks tõlgendama kvalifitseeritud arst.

Võimalikud ELISA tulemused

Sõltuvalt analüüsi sisust võib vorm esitada tabeli kujul andmeid kõigi antikehade või antigeenide kohta koos märkustega negatiivse või positiivse reaktsiooni kohta või näidatakse tulemuse kvantitatiivne väärtus (negatiivne, nõrgalt positiivne, positiivne või järsult positiivne).

Viimane võimalus määrab, kui palju antikehi sisaldub analüüsitud proovis. Veel üks kvantitatiivne näitaja on antikehade avidity indeks, väljendatuna protsentides. See näitab, kui palju aega on möödunud nakkusliku protsessi algusest (mida suurem on indeks, seda rohkem).

Tänapäeval toodetakse tuhandeid ELISA testisüsteeme, mis võimaldavad tuvastada spetsiifilisi antikehi ja antigeene mitmesuguste patoloogiate korral. Seetõttu kasutatakse seda analüüsi peaaegu kõigis meditsiinitööstustes. ELISA abil tehtud diagnoos on piisava ravi määramise ja haiguse efektiivse ravi tagatis.

Vajalike reaktiivide olemasolu ja labori hea korralduse korral saate testi tulemuse 1–2 päeva jooksul pärast vere kogumist. Mõnel juhul võib hädaolukorra lahendamiseks vajaliku perioodi lühendada 2-3 tunnini.

Kvaliteetse ELISA tulemus on üheselt mõistetav otsus: soovitud aine on kas leitud või ei leita proovist. Kui me räägime kvantitatiivsest analüüsist, siis saab kontsentratsiooni väljendada numbrilise väärtusena või teatud arvu "+" märkidega (ühest mitmeni).

Leia rohkem:

• Antikehade vereanalüüs: immuunsüsteemi diagnoosimine
• Immuunanalüüsi vereanalüüs parasitoloogias